一、石蠟切片厚度一般為多少
石蠟切片厚度通常為4~7微米,切出一片接一片的蠟帶,用毛筆輕托輕放在紙上。這個厚度通??梢詽M足大部分實驗室的需求。如果需要更薄的切片厚度,則可以使用微切機進行切割,厚度可達1-2微米,但這種切片會更脆弱,操作難度更大。
二、石蠟切片制作過程是什么
石蠟切片的制作步驟如下:
1、組織包埋
(1)乙醇脫水:組織經(jīng)不同濃度的乙醇溶液進行逐級脫水70%、80%、90%、95%、100%、100%,各級乙醇 40min(注意:骨性及鈣化組織需在JYBL-Ⅱ脫鈣液中浸泡24h,待組織軟化后再進行乙醇脫水步驟)。
(2)透明:組織依次浸泡于三個二甲苯中,每缸各1h。
(3)浸蠟:組織依次浸泡于三個石蠟缸中,每缸各1h。
(4)包埋:將液態(tài)的石蠟倒入模具盒中,再將浸好蠟的組織塊平放底部,注意切面方向朝下放置,待石蠟?zāi)毯笕サ舭窨?,完全冷卻變硬后再修整蠟塊,組織外圍的石蠟保留適中以便切片。
2、切片與貼片
切片制作將預(yù)冷的蠟塊固定在石蠟切片機上,使石蠟塊的切面與刀口成平行方向,刀的傾斜度通常15℃,轉(zhuǎn)動輪轉(zhuǎn)推進器,調(diào)節(jié)切片厚度為4μm,切成厚度均勻的切片。
左手持毛筆,右手旋動切片機轉(zhuǎn)把,切片帶出來之后,用毛筆輕輕托起,再用鑷子輕鑷蠟片,以正面放入展片箱中,其水溫45℃左右。待攤平整后撈片。貼附切片左手持載玻片之一端,垂直入水去附貼切片,右手用鑷子輔助推動,附貼至玻片上的三分之二處。切片貼附后,放在空氣中稍晾干,放置65℃烤片機上烤1h,再放置烘箱內(nèi)烘烤2h。
3、石蠟切片脫蠟至水
依次將石蠟切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脫蠟。
4、HE染色
石蠟切片入蘇木素染0.5-1分鐘min,自來水漂洗,1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來水漂洗,然后1%氨水水溶液返藍1min,流水沖洗數(shù)秒,放入伊紅染液中染色數(shù)秒,流水漂洗。
5、脫水封片
石蠟切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-無水乙醇5min-無水乙醇5min-二甲苯5min透明,將切片從二甲苯拿出來中性樹膠封片。